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小鼠原代冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮原代細(xì)胞

細(xì)胞培養(yǎng)操作：

收貨處理取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)

傳代密度細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

傳代代數(shù)可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

傳代比例傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿

傳代方法：

1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；

4.待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。

商品屬性：

細(xì)胞基本屬性：

種屬來源：小鼠

組織來源：冠狀動(dòng)脈冠狀動(dòng)脈

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：

產(chǎn)品貨期：4周左右

運(yùn)輸方式：T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制：僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：:小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞采用混合酶短暫消化后組織貼塊、結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，小鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自冠狀動(dòng)脈組織；冠狀動(dòng)脈是供給心臟血液的動(dòng)脈，起于主動(dòng)脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則，將冠狀動(dòng)脈的分布分為三型：右優(yōu)勢(shì)型、均衡型、左優(yōu)勢(shì)型。左右冠狀動(dòng)脈是升主動(dòng)脈的對(duì)分支。左冠狀動(dòng)脈為一短干，發(fā)自左主動(dòng)脈竇，經(jīng)肺動(dòng)脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動(dòng)脈的后室間支相吻合。冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞呈單層扁平分布，是一薄層的專門上皮細(xì)胞，它形成冠狀動(dòng)脈的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至最小的微血管。內(nèi)皮細(xì)胞層是血液和其它組織的天然屏障。內(nèi)皮細(xì)胞功能病變是造成動(dòng)脈粥樣硬化的主要原因。內(nèi)皮細(xì)胞同時(shí)會(huì)合成和分泌凝血和纖維蛋白溶解系統(tǒng)的增強(qiáng)和抑制物，以及影響血小板粘附和聚集的媒介物。它們同時(shí)也會(huì)分泌控制細(xì)胞增殖的蛋白來維持血管壁的健康。人內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)分泌t-PA和PAI-1等抗血栓因子以及響應(yīng)TNF-α，繼而分泌細(xì)胞因子GM-CSF，表達(dá)ICAM-1表面抗體，產(chǎn)生大量的一氧化氮和endothelin。經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)（PTCA）造成的內(nèi)皮細(xì)胞受損和功能破壞可能是導(dǎo)致術(shù)后動(dòng)脈再狹窄的重要原因。

原代細(xì)胞培養(yǎng)的主要步驟包括：

?一、剝離組織，去除外膜、結(jié)締組織等?：將組織從動(dòng)物體中取出，并去除可能存在的外膜或結(jié)締組織等雜質(zhì)。

二、?洗滌后將組織剪成1mm左右的小塊?：使用生理鹽水或其他適當(dāng)?shù)木彌_液洗滌組織，然后將其剪成約1mm大小的小塊。

三、?用0.1%～0.2%的消化?：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩沖液中，進(jìn)行消化。消化時(shí)間可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時(shí)間短，冷消化時(shí)間長(zhǎng)但條件更溫和。

?四、吹打分散后，過濾、計(jì)數(shù)?：將消化后的細(xì)胞吹打到一個(gè)離心管中，然后過濾、計(jì)數(shù)。

五、?按30萬/毫升分瓶培養(yǎng)?：將計(jì)數(shù)后的細(xì)胞按30萬/毫升的濃度分瓶培養(yǎng)。

公司正在出售的產(chǎn)品：